SAMHD1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-424985-ACT

マウスのSamhd1は、dNTPトリホスホヒドロラーゼであるSAMHD1をコードしており、DNA複製および修復の過程でゲノム安定性を維持するために、細胞内デオキシヌクレオチド（dNTP）プールを調節します。ヌクレオチドの利用可能性を調整することで、SAMHD1はDNA損傷応答シグナル、複製ストレス経路、細胞周期制御と交差し、さらに核酸基質の利用可能性を変化させることにより自然免疫センサー機構にも影響を与え得ます。骨髄系およびリンパ系の系譜では、SAMHD1はレトロウイルス複製の制限や炎症性シグナル伝達プログラムの制御における役割が研究されています。SAMHD1活性の調節異常は、実験モデルにおいてインターフェロン関連表現型の異常、遺伝毒性ストレスに対する応答の変化、ならびに疾患に関連する免疫学的・血液学的プロセスと結び付けられています。

SAMHD1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Samhd1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SAMHD1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Samhd1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSamhd1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SAMHD1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSamhd1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSAMHD1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSamhd1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSAMHD1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。