SAMHD1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406002-ACT

ヒトSAMHD1（SAMおよびHDドメイン含有タンパク質1）はdNTPトリホスホヒドロラーゼであり、細胞内デオキシヌクレオチドプールを調節することで、DNA複製の忠実度、修復能、ならびにゲノム安定性に影響を与えます。dNTPの利用可能量を制御することにより、SAMHD1は複製ストレス応答やDNA損傷シグナル伝達経路と関わり、細胞周期の進行やヌクレオチド恒常性の維持を形作る過程にも関与します。さらにSAMHD1は、逆転写に必要なdNTP基質を制限することで、骨髄系細胞および休止期T細胞におけるレトロウイルス複製を抑制し、自然免疫の調節とも関連づけられています。SAMHD1の機能異常や変異は炎症性・自己免疫性の表現型と関連して報告されており、ウイルス—宿主相互作用やがん関連の複製ストレスの文脈でも研究されています。

SAMHD1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SAMHD1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SAMHD1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SAMHD1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSAMHD1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SAMHD1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSAMHD1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSAMHD1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSAMHD1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSAMHD1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。