Sam 68 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401378-NIC

KHDRBS1は、STARファミリーに属するRNA結合タンパク質Sam 68をコードしており、選択的スプライシング、mRNAの核外輸送、安定性、翻訳を制御することで、シグナル伝達とRNA代謝を結び付けます。Sam 68は核内および細胞質の両方で機能し、SrcファミリーキナーゼやMAPKなどの下流で起こるリン酸化によって調節され、増殖因子シグナルを転写産物アイソフォームの選択に連結します。RNAプロセシングプログラムの制御を介して、KHDRBS1は細胞周期の進行、アポトーシス、細胞骨格ダイナミクスに影響し、がん関連モデルでは増殖や浸潤性表現型への関与がしばしば示唆されています。Sam 68の機能異常は、神経系におけるRNAプロセシングの変化やストレス応答性遺伝子発現の変動とも関連づけられており、組織特異的スプライシングやRNA制御ネットワークの研究における重要性を支持しています。

Sam 68 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における KHDRBS1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、KHDRBS1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、KHDRBS1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、KHDRBS1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。