SAF-B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403795-ACT

SAFB (SAF-B, fator B de ligação à matriz de ancoragem) é uma proteína ligante de DNA e RNA associada à matriz nuclear, que coordena a organização da cromatina com o controle transcricional e o processamento do pré‑mRNA. Ela interage com regiões de ancoragem ao arcabouço/matriz e regula programas de expressão gênica ligados à atividade da RNA polimerase II, ao splicing alternativo e à transcrição responsiva ao estresse. O SAF-B tem sido implicado na sinalização de receptores hormonais, particularmente em redes regulatórias associadas ao receptor de estrogênio, e contribui para a manutenção da função do genoma ao acoplar a arquitetura nuclear ao metabolismo de RNA. A desregulação da expressão ou da função de SAFB tem sido associada a estados transcricionais alterados observados em vias relacionadas ao câncer e em outros distúrbios que envolvem regulação gênica aberrante.

SAF-B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SAFB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SAF-B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SAFB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SAFB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SAF-B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SAFB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SAF-B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SAF-B em células tumorais com expressão de SAFB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.