S-100PBP CRISPR Activationプラスミド (h2): sc-413030-ACT-2

ヒトS100PBP（S-100P結合タンパク質）はS100PBP遺伝子にコードされ、カルシウム結合タンパク質S100Pの細胞内結合パートナーとして機能し、Ca2+依存的シグナル伝達と細胞骨格の構築および細胞接着ダイナミクスの協調に関与すると考えられている。このタンパク質は微小管関連プロセスの制御に関連づけられており、細胞極性や運動性を調節するタンパク質間相互作用ネットワークを介して、小胞輸送や細胞周期に関連する事象にも影響し得る。S100PBPの発現パターンの変化は複数の腫瘍状況で報告されており、臨床的転帰を示唆することなく、遊走・浸潤や上皮間葉転換（EMT）の基盤機構を解析する上で有用であることを支持する。ヒト細胞モデルにおいてS100PBPを遺伝子編集または機能攪乱することで、S100Pを中心とした経路の機能解析、相互作用パートナーの同定、ならびにがん生物学および細胞シグナル研究に関連する下流の転写変化や表現型変化の評価が可能となる。

S-100PBP CRISPR活性化プラスミド（h2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性S100PBPの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

S-100PBP CRISPR 活性化プラスミド (h2) は、ヒト細胞株における S100PBP 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はS100PBP転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性S-100PBPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のS100PBP遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるS-100PBP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびS100PBP発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるS-100PBP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。