RyR CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401470-ACT

ヒトのRYR1は、リアノジン受容体（RyR1）をコードしている。RyR1は筋小胞体／小胞体に存在する四量体のCa²⁺放出チャネルであり、膜の脱分極を迅速な細胞内カルシウム動員へと結び付ける。RyR1によって生じるCa²⁺トランジェントは、興奮–収縮連関、カルシウム誘発性カルシウム放出（CICR）、ならびにミトコンドリア代謝、細胞骨格ダイナミクス、カルシウムに対する転写応答を形作る下流シグナル経路を制御する。RYR1の活性は、内腔Ca²⁺、酸化還元状態、そしてFKBP12、カルモジュリン、トリアジン／ジャンクチン複合体などのアクセサリータンパク質によって厳密に制御されている。RyR1チャネルのゲーティング異常とCa²⁺恒常性の破綻は骨格筋の病態生理と関連しており、悪性高熱症の感受性や先天性ミオパチーの文脈でしばしば研究されている。

RyR-1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RYR1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RyR-1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RYR1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRYR1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RyR-1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRYR1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRyR-1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRYR1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRyR-1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。