RyR-3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402031-ACT

ヒトRYR3はリアノジン受容体3（RyR-3）をコードしており、これは小胞体／筋小胞体に存在する巨大なCa²⁺放出チャネルです。上流のセカンドメッセンジャーに応答して細胞内カルシウムシグナルを増幅します。RyR-3は、興奮収縮連関に隣接するカルシウム動態、カルシウム誘発性カルシウム放出（CICR）、さらに分泌・シナプス可塑性・CaMKおよびカルシニューリン／NFATシグナルによって制御される転写プログラムなど、より広範なCa²⁺依存性プロセスに関与します。細胞質およびオルガネラのCa²⁺恒常性を形成することで、RYR3はミトコンドリアとのカップリング、膜の興奮性、ストレス応答にも影響を及ぼします。リアノジン受容体を介したカルシウム制御の変調は神経・筋関連の表現型と関連づけて示唆されており、不整脈原性や神経発達疾患の機序に関する文脈で研究されていますが、臨床的転帰を示唆するものではありません。

RyR-3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RYR3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RyR-3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RYR3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRYR3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RyR-3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRYR3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRyR-3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRYR3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRyR-3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。