RXRβ CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402266-ACT

レチノイドX受容体ベータ（RXRB；RXRβ）は、リガンドによって活性化される核内受容体であり、PPAR、LXR、FXR、VDR、甲状腺ホルモン受容体など複数の受容体ファミリーに共通する中核的な転写パートナーとして機能します。RXRβはヘテロ二量体を形成し、レチノイド応答エレメントに結合することで、脂質・糖代謝、コレステロールおよび胆汁酸恒常性、炎症、細胞分化を制御する遺伝子プログラムを統合的に調節します。RXRB依存的な転写制御は、レチノイドシグナルを、組織特異的な代謝状態や免疫状態を形作るより広範な核内受容体ネットワークと結び付けます。RXRβシグナルの破綻は、代謝性疾患やがんに伴う転写プログラムの再配線に関与すると示唆されており、RXRBは経路に焦点を当てた機序解析研究に有用なノードとなります。

RXRβ CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RXRBの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RXRβ CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RXRB 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRXRB転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RXRβの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRXRB遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRXRβ依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRXRB発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRXRβ経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。