RUNX2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400183-ACT

RUNX2 codifica um fator de transcrição relacionado à família Runt que atua como regulador mestre do comprometimento da linhagem de osteoblastos e do desenvolvimento esquelético, ao coordenar programas transcricionais que controlam a produção de matriz extracelular, a mineralização e a progressão do ciclo celular. Integra sinais das vias BMP/TGF-β, Wnt/β-catenina, Hedgehog e MAPK para regular genes a jusante envolvidos na formação e remodelação óssea. A expressão ou atividade aberrante de RUNX2 está ligada a distúrbios do desenvolvimento de osso e cartilagem e tem sido associada a estados de diferenciação alterados e fenótipos invasivos em diversos contextos de câncer. Como fator definidor de linhagem, RUNX2 é amplamente utilizado para investigar redes transcricionais que regem a diferenciação mesenquimal e a remodelação do microambiente.

RUNX2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RUNX2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RUNX2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RUNX2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RUNX2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RUNX2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RUNX2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RUNX2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RUNX2 em células tumorais com expressão de RUNX2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.