RUNX1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400803-ACT

RUNX1 (AML1) é um fator de transcrição específico de sequência do complexo core-binding factor, que coordena a especificação de células-tronco e progenitoras hematopoéticas, o compromisso de linhagem e a maturação das populações mieloides e linfoides. Ele regula programas gênicos que controlam proliferação, diferenciação e apoptose por meio da ligação a enhancers e promotores em conjunto com cofatores como CBFβ e remodeladores de cromatina, interagindo com redes de sinalização de citocinas e do desenvolvimento. Alterações na dosagem ou na função de RUNX1 estão fortemente associadas a neoplasias hematológicas e síndromes de falência da medula óssea, incluindo translocações recorrentes e mutações pontuais que perturbam o controle transcricional da hematopoiese. Como um nó central nas decisões de destino das células sanguíneas, RUNX1 é amplamente estudado em regulação transcricional, remodelamento epigenético e modelagem de vias relevantes para leucemia.

RUNX1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RUNX1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RUNX1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RUNX1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RUNX1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RUNX1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RUNX1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RUNX1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RUNX1 em células tumorais com expressão de RUNX1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.