RUFY4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405000-ACT

RUFY4（RUN and FYVE domain containing 4）は、低分子量GTPアーゼのシグナル伝達とエンドソーム動態を結び付ける膜輸送イベントに関与すると考えられている、細胞質アダプタータンパク質をコードします。RUNドメインおよび脂質結合性のFYVE関連特徴を介して、RUFY4は小胞輸送、エンドソーム—リソソームの組織化、ならびに受容体やカーゴの輸送経路の空間的制御に関与し、自然免疫シグナルの出力に影響を与え得ます。発現パターンや関連経路から、炎症や抗原の取り扱いを形作る過程を含む、骨髄系細胞や免疫細胞の生物学における役割が示唆されています。RUFY4に関わる輸送制御や免疫シグナルのネットワークの破綻は、感染症研究、炎症性疾患、腫瘍—免疫相互作用の研究において重要であり、エンドソーム制御が下流の経路活性化に影響し得ます。

RUFY4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RUFY4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RUFY4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RUFY4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRUFY4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RUFY4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRUFY4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRUFY4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRUFY4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRUFY4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。