RRBP1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-410995

Panoramica

RRBP1 (ribosome binding protein 1) codifica una proteina associata alla membrana del reticolo endoplasmatico (RE) che supporta il targeting co-traduzionale dei polipeptidi nascenti verso il RE e contribuisce all’organizzazione del RE e alla capacità della via secretoria. Collegando i ribosomi al RE rugoso, RRBP1 influenza la sintesi, il ripiegamento e il traffico delle proteine, processi strettamente connessi all’omeostasi del RE e alla risposta alle proteine mal ripiegate (unfolded protein response, UPR). Un’alterazione dell’espressione di RRBP1 è stata riportata in contesti di stress cellulare e rimodellamento proliferativo, rendendola rilevante per lo studio della proteostasi, degli adattamenti associati al RE e delle reti di segnalazione legate alla domanda secretoria. RRBP1 è quindi di interesse in modelli che esaminano la sensibilità allo stress del RE, le dinamiche del traffico di membrana e le perturbazioni della gestione proteica associate a malattie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RRBP1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RRBP1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RRBP1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RRBP1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RRBP1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RRBP1 per lo studio della segnalazione di RRBP1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RRBP1 critici per la funzione di RRBP1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RRBP1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RRBP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal RRBP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RRBP1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RRBP1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR RRBP1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RRBP1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RRBP1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.