RPL29 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403879-ACT

RPL29 codifica a proteína ribossômica L29, um componente básico da subunidade maior 60S do ribossomo que contribui para a montagem ribossômica e para a tradução eficiente de mRNAs no citoplasma. Como parte do maquinário central de síntese proteica, a RPL29 sustenta a proteostase e programas de crescimento celular que estão intimamente acoplados à biogênese de ribossomos e ao controle translacional. A expressão alterada de proteínas ribossômicas, incluindo a RPL29, é frequentemente observada em condições que envolvem proliferação desregulada e adaptação ao estresse, e pode influenciar fenótipos celulares por meio de mudanças na tradução global e seletiva. Assim, a RPL29 serve como um ponto útil para estudar como a composição do ribossomo e a capacidade translacional se conectam ao controle do ciclo celular, à reprogramação metabólica e às vias de resposta ao estresse.

RPL29 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RPL29 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RPL29 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RPL29 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RPL29, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RPL29. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RPL29 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RPL29 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RPL29 em células tumorais com expressão de RPL29 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.