Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
RPA194 Antibody (F-6): sc-46699. Western blot analysis of RPA194 expression in ES-2 whole cell lysate (A) and KNRK nuclear extract (B). Detection reagent used: m-IgG2b BP-HRP: sc-542741.
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RPA194双切口酶质粒(h): sc-400816-NIC
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- RPA194 双切口酶质粒（h）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- RPA194双切酶质粒（h）和RPA194双切酶质粒（h2）编码针对POLR1A的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：RPA194: sc-48385，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
RPA194双切口酶质粒(h) | sc-400816-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RPA194双切口酶质粒(h2) | sc-400816-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
POLR1A 编码 RPA194，即 RNA 聚合酶 I 的催化亚基，负责在核仁内驱动 47S 前体 rRNA 的合成，这是核糖体生物发生的限速步骤。RPA194 在 Pol I 转录机器中发挥作用，维持核仁结构组织、支持细胞生长，并将核糖体 RNA 的加工与细胞代谢状态相协调。干扰 POLR1A 依赖的 rRNA 转录会改变核仁应激信号及其下游与 p53 相关的应答，从而将该通路与细胞周期控制和基因组监视联系起来。Pol I 活性的遗传变异与失调与核糖体病相关表型有关，并在增殖生物学与应激适应研究中受到广泛关注。
RPA194 双切酶质粒（h）由一对匹配的质粒组成，专为在 human 细胞系中对 POLR1A 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对POLR1A内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏POLR1A的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了POLR1A基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。