RORγ CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400912-ACT

RORC は核内受容体 RORγ をコードしており、RORγ はリガンドによって制御される転写因子として、免疫分化や組織炎症に関与する遺伝子プログラムを統合的に調節する。ヒト T 細胞では、RORγt アイソフォームの活性が Th17 系統へのコミットメントおよび IL-17A/F や IL-23 応答性経路などのサイトカインネットワークの制御において中心的であり、宿主防御や粘膜バリアの生物学と結び付いている。さらに RORγ は、核内受容体シグナル伝達とクロマチンリモデリングを介して、代謝や概日リズム関連の転写入力も統合する。RORC の発現やシグナル伝達の破綻は、炎症性疾患や自己免疫疾患の機序、ならびに腫瘍—免疫相互作用の変化と関連付けられており、免疫学およびがん生物学モデルにおける経路解析の有用な結節点となっている。

RORγ CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RORCの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RORγ CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RORC 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRORC転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RORγの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRORC遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRORγ依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRORC発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRORγ経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。