robo2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401916-ACT

ROBO2は、ラウンドアバウトガイダンス受容体2（robo2）をコードしており、SLITリガンドに対する膜貫通型受容体として機能する。ROBO2は、保存されたSLIT–ROBOシグナル伝達を介して、軸索誘導、神経細胞の移動、ならびに組織パターニングを制御する。ヒト細胞では、RhoファミリーGTPアーゼシグナルとその下流の接着ダイナミクスを調節することで、細胞骨格の再構築や方向性のある細胞運動に影響を与える。神経発生にとどまらず、ROBO2活性は上皮組織の構築や分岐形態形成とも関連づけられており、器官形成や細胞配置における役割が示唆されている。ROBO2の発現変動や経路の破綻は神経発達関連の表現型と関連し、異常な移動や浸潤に関わるプログラムが関与する文脈で検討されている。

robo2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ROBO2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

robo2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ROBO2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はROBO2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性robo2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のROBO2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるrobo2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびROBO2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるrobo2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。