RNMT Double Nickaseプラスミド (h): sc-417964-NIC

RNAグアニン-7メチルトランスフェラーゼ（RNMT）は、RNAポリメラーゼII転写産物にN7-メチルグアノシン（m7G）キャップを付加するmRNAキャップメチルトランスフェラーゼ複合体の触媒サブユニットである。このキャップ修飾は、転写共役的なmRNAプロセシング、核外輸送、翻訳開始、ならびにエキソヌクレアーゼによる分解からの保護に必須であり、RNMT活性を遺伝子発現プログラムの全体的制御と結び付けている。RNMTの機能は転写およびRNAプロセシング経路と連関し、転写産物の安定性や翻訳産物量への影響を通じて、増殖やストレス応答シグナルの協調にも寄与する。mRNAキャッピングやキャップ依存的翻訳の破綻は、増殖状態の変化や腫瘍性の遺伝子発現シグネチャーと関連づけられており、RNMTは疾患関連の文脈におけるRNA代謝の機構研究に有用な結節点となる。

RNMT ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における RNMT 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、RNMT内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、RNMTの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、RNMTが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。