RNF8 Plasmide Double Nickase (h): sc-401909-NIC

RNF8 codifica una ligasi E3 ubiquitina-proteina che funge da fattore precoce di segnalazione della cromatina nella risposta al danno del DNA, catalizzando l’ubiquitinazione nei siti di rotture a doppio filamento per promuovere il reclutamento dei mediatori di riparazione a valle. Coordinandosi con eventi di fosforilazione dipendenti da ATM e con cascate di segnalazione dell’ubiquitina, RNF8 contribuisce a organizzare la scelta della via di riparazione e supporta, in modo dipendente dal contesto, sia la ricombinazione omologa sia il non-homologous end joining (NHEJ). L’attività di RNF8 contribuisce al mantenimento della stabilità genomica, alla regolazione dei checkpoint del ciclo cellulare e al rimodellamento della cromatina in corrispondenza del DNA danneggiato. L’alterazione della segnalazione dell’ubiquitina dipendente da RNF8 è spesso studiata in modelli di instabilità genomica e di difetti di riparazione del DNA associati al cancro.

RNF8 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RNF8 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RNF8. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RNF8. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RNF8 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.