RNF213 Double Nickaseプラスミド (h): sc-418450-NIC

RNF213は、RINGフィンガー構造を含む大型のE3ユビキチンリガーゼであり、AAA+ ATPaseでもあるタンパク質をコードしており、ユビキチン依存的なタンパク質分解回転の制御や、ストレス応答性シグナル伝達に寄与します。RNF213は、血管内皮および血管の恒常性を調整する経路、炎症性シグナル伝達、低酸素や代謝ストレスに対する細胞応答に関わることが示唆されており、血管新生に伴うリモデリングにおける役割とも整合します。遺伝的変異やRNF213機能の変化は、もやもや病をはじめとする脳血管疾患や各種血管病変の表現型と強く関連しており、関連するヒト細胞モデルを用いた機序解明研究が促進されています。さらに、RNF213活性は自然免疫経路の調節とも関連づけられており、ユビキチン化、炎症、血管生物学のクロストークを解析するうえで有用な結節点となります。

RNF213 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における RNF213 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、RNF213内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、RNF213の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、RNF213が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。