RNF213 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-418450-ACT

RNF213は、AAA+ ATPase活性をもつ大型のRINGフィンガー型E3ユビキチンリガーゼをコードしており、ユビキチン依存的なプロテオスタシス（タンパク質恒常性）や、ストレス応答性の細胞シグナル伝達の再編に寄与します。ヒト細胞ではRNF213は、インターフェロン関連応答を含む自然免疫・炎症プログラムの制御や、タンパク質ターンオーバーおよび経路間クロストークの調節を介した血管・血管新生プロセスの制御に関与することが示されています。遺伝的変異やRNF213発現の変化は、もやもや病を含む脳血管・血管障害性の表現型と関連づけられており、内皮機能や免疫活性化の文脈でも研究が進められています。これらの特性により、RNF213は、疾患関連の細胞モデルにおいてユビキチンシグナル、血管生物学、ならびに炎症に関連する分子機構を解明するための重要な標的となります。

RNF213 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RNF213の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RNF213 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RNF213 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRNF213転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RNF213の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRNF213遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRNF213依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRNF213発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRNF213経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。