Plasmide Double Nickase (h) RNF182: sc-415138-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) RNF182 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide RNF182 Double Nickase (h) et le plasmide RNF182 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant RNF182. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (h) RNF182 | sc-415138-NIC | 20 µg | $410.00 |
RNF182 code une ligase E3 à doigt RING qui catalyse le transfert d’ubiquitine vers des substrats protéiques spécifiques, contrôlant ainsi la stabilité des protéines et l’amplitude des signaux dans le système ubiquitine–protéasome. Grâce à une régulation, dépendante de l’ubiquitination, d’effecteurs intracellulaires, RNF182 est associée à des voies impliquées dans les réponses au stress cellulaire, le contrôle qualité des protéines et le renouvellement de protéines membranaires et de signalisation. Des altérations de l’expression de RNF182 ont été rapportées dans des études portant sur la biologie du système nerveux et la neuroinflammation, en accord avec des rôles dans l’homéostasie neuronale et une protéostasie finement régulée. Ces caractéristiques font de RNF182 une cible utile pour étudier comment les ligases d’ubiquitine façonnent les réseaux de signalisation et les transitions d’état cellulaire dans des modèles de cellules humaines.
RNF182 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RNF182 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RNF182. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RNF182. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RNF182.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.