RNF149 Double Nickaseプラスミド (m): sc-426694-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- RNF149 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- RNF149ダブルニカースプラスミド（m）およびRNF149ダブルニカースプラスミド（m2）は、Rnf149を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
RNF149 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-426694-NIC | 20 µg | $410.00 |
マウスのRnf149は、RINGフィンガー型E3ユビキチンリガーゼであるRNF149をコードしており、ユビキチン依存的なタンパク質分解と細胞内プロテオスタシス（タンパク質恒常性）の制御に寄与します。ユビキチン–プロテアソーム系（UPS）の制御の一環として、RNF149はタンパク質品質管理、シグナルの強度調節、ならびに細胞の生存と恒常性を形作るストレス適応応答を司る経路に関与します。ユビキチン化プログラムの変調は、増殖制御の破綻や神経変性に関連するプロテオトキシック・ストレスなど、疾患関連の表現型に広く関与することが示されており、RNF149は機構解析研究における有用な結節点となります。RNF149の機能解析は、哺乳類細胞においてE3リガーゼが基質の安定性や下流経路の出力をどのように調整するかを解明する研究を後押しします。
RNF149 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Rnf149 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Rnf149内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Rnf149の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Rnf149が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。