RNF145 Plasmide Double Nickase (m): sc-428832-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RNF145 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il RNF145 Double Nickase Plasmid (m) e il RNF145 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Rnf145. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RNF145 Plasmide Double Nickase (m) | sc-428832-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RNF145 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-428832-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Rnf145 codifica RNF145, una ligasi E3 dell’ubiquitina di tipo RING residente nel reticolo endoplasmatico (ER), che contribuisce a regolare l’omeostasi cellulare di steroli e lipidi promuovendo il turnover dipendente dall’ubiquitina di componenti chiave della via. L’attività di RNF145 si integra con i meccanismi di controllo qualità proteico associati all’ER e con la proteostasi, collegando l’ubiquitinazione a risposte adattative nella composizione lipidica di membrana e nello stato metabolico. Per la sua influenza sulle reti di regolazione del colesterolo e sui programmi trascrizionali correlati, Rnf145 è spesso studiato nel contesto della disregolazione metabolica e di fenotipi di stress guidati dai lipidi. L’analisi di RNF145 tramite perdita o acquisizione di funzione supporta studi meccanicistici della segnalazione ubiquitina-dipendente, della biologia della membrana dell’ER e degli effetti a valle sulle vie del metabolismo lipidico.
RNF145 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Rnf145 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Rnf145. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Rnf145. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Rnf145 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.