RNF123 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403631-ACT

RNF123（別名KPC1）は、RING型のE3ユビキチンリガーゼをコードしており、特定基質のユビキチン依存的な分解（ターンオーバー）を触媒することで、タンパク質恒常性の制御に寄与します。RNF123は、CDKN1B/p27のユビキチン介在性プロセシングおよび関連するチェックポイント回路を介した細胞周期進行の調節に関与するとされ、RNF123活性が細胞増殖やストレス応答プログラムと結び付くことが示唆されています。ユビキチン–プロテアソーム系の一要素として、RNF123は増殖・分化を司る制御タンパク質の安定性を調整することで、シグナル伝達の出力に影響を与えます。そのため、RNF123が関与するユビキチン化経路の破綻は、がん化シグナル、ゲノム安定性、ならびにプロテオスタシス関連疾患の機序研究において重要な関心対象となっています。

RNF123 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RNF123の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RNF123 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RNF123 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRNF123転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RNF123の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRNF123遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRNF123依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRNF123発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRNF123経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。