RNase H1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402850-ACT

ヒトRNASEH1はRNase H1をコードしており、RNase H1は核およびミトコンドリアに局在するエンドヌクレアーゼとして、RNA:DNAハイブリッドのRNA鎖を特異的に分解します。これにより、転写および複製の過程で生じるRループの除去が促進されます。RNase H1は、RNAプライマーの処理やハイブリッド中間体の解消を通じて、ゲノム安定性、ミトコンドリアDNAの複製と修復、ならびに複製—転写の衝突（コンフリクト）の調整に寄与します。RNA:DNAハイブリッドの代謝（ターンオーバー）の破綻は、複製ストレスやDNA損傷シグナル伝達と関連づけられており、RNASEH1は、核酸代謝と細胞ストレス応答を結び付ける経路を研究する上で重要な結節点となります。さらに、RNase H1機能の変化はミトコンドリア機能不全の表現型とも関連しており、疾患に関連する状況下でのミトコンドリアゲノム維持機構を機構的に検討することを可能にします。

RNase H1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RNASEH1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RNase H1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RNASEH1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRNASEH1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RNase H1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRNASEH1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRNase H1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRNASEH1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRNase H1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。