RMDN3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-408451-ACT

RMDN3 (também conhecida como PTPIP51) é uma proteína associada às mitocôndrias que ajuda a coordenar a comunicação entre as mitocôndrias e o retículo endoplasmático, influenciando a ancoragem entre organelos e a transferência de cálcio. Por meio desses sítios de contato, a RMDN3 contribui para a regulação da dinâmica mitocondrial, da bioenergética e de vias de sinalização responsivas ao estresse que moldam a sobrevivência celular e a homeostase. Alterações na expressão ou na função da RMDN3 têm sido associadas a uma desregulação do manejo de cálcio e à disfunção mitocondrial, processos implicados em fenótipos neurodegenerativos e na remodelação metabólica associada ao câncer. Como resultado, a RMDN3 é estudada em modelos de estresse mitocondrial, acoplamento RE–mitocôndria e adaptação celular a desafios proteostáticos ou oxidativos.

RMDN3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RMDN3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RMDN3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RMDN3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RMDN3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RMDN3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RMDN3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RMDN3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RMDN3 em células tumorais com expressão de RMDN3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.