Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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RIP3 Plasmide Double Nickase (h): sc-401008-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RIP3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il RIP3 Double Nickase Plasmid (h) e il RIP3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira RIPK3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: RIP3 Antibody (B-2): sc-374639
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RIP3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401008-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RIP3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401008-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RIPK3 codifica la chinasi proteica 3 serina/treonina interagente con il recettore (RIP3), un regolatore chiave della necrosi programmata (necroptosi) a valle dei recettori di morte e dei sensori dell’immunità innata. Una volta attivata, RIP3 forma il necrosoma con RIPK1 e promuove la fosforilazione di MLKL, collegando la segnalazione infiammatoria alla destabilizzazione della membrana e al rilascio di pattern molecolari associati al danno (DAMP). L’attività di RIP3 integra segnali provenienti da TNF, TLR e vie correlate agli interferoni e può inoltre influenzare processi metabolici e mitocondriali durante lo stress. Una segnalazione di RIPK3 deregolata è stata associata a danno tissutale infiammatorio e a risposte di morte cellulare alterate in contesti rilevanti per il cancro, rendendolo un nodo utile per analizzare le decisioni di destino cellulare.
RIP3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RIPK3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RIPK3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RIPK3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RIPK3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.