RICK Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400731-ACT

A quinase 2 de serina/treonina que interage com receptores (RIPK2; também conhecida como RICK) é uma quinase de sinalização citosólica que atua como um adaptador-chave a jusante dos receptores de reconhecimento de padrões NOD1 e NOD2. Ao detectar motivos de peptidoglicano bacteriano, a RIPK2 medeia uma sinalização dependente de ubiquitina para ativar as vias de NF-κB e MAPK, modulando a expressão de genes inflamatórios, a produção de citocinas e a comunicação cruzada da imunidade inata com células epiteliais e mieloides. A RIPK2 também se conecta à autofagia e à sinalização de estresse celular por meio da regulação de ligases de ubiquitina e de cascatas de quinases a jusante. A atividade desregulada da via da RIPK2 tem sido associada a fenótipos inflamatórios crônicos e a patologias mediadas pelo sistema imune, o que a torna um alvo amplamente estudado em pesquisas sobre interação hospedeiro–micróbio e sinalização inflamatória.

RICK O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RIPK2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RICK O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RIPK2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RIPK2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RICK. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RIPK2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RICK no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RICK em células tumorais com expressão de RIPK2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.