Rho 7 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404094-ACT

ヒトRND2はRho 7をコードしており、Rhoファミリーに属する非典型的な低分子GTPアーゼとして、Rho GTPアーゼシグナル伝達ネットワークを調節することで、アクチン細胞骨格の再編成、神経突起の伸長、膜動態を制御します。Rho 7の活性は、細胞骨格の収縮性や小胞輸送を協調させる経路と連携することで、細胞形態、遊走、接着に影響を与えます。RND2は神経発生プログラムや神経細胞分化との関連が示されており、細胞運動性や生存シグナルの破綻を伴う状況において、発現パターンの変化が報告されています。これらの特性により、Rho 7は、細胞骨格依存的プロセスや、細胞のアイデンティティと移動を形作る転写プログラムを研究するうえで有用な標的となります。

Rho 7 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RND2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Rho 7 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RND2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRND2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Rho 7の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRND2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRho 7依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRND2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRho 7経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。