Rheb Double Nickaseプラスミド (h): sc-400539-NIC

RHEB は、Ras 関連の低分子 GTPase である Rheb をコードしており、Rheb は増殖因子および栄養シグナルに応答して mTORC1 複合体に直接結合することで、その主要な上流活性化因子として機能します。TSC1/TSC2 複合体からの入力や細胞のエネルギー状態といったシグナルを統合することにより、Rheb はタンパク質合成、オートファジー、リソソーム生合成、ならびに細胞増殖の制御に寄与します。RHEB–mTOR シグナルの破綻は、複数の疾患関連状況において代謝制御の変化や異常増殖と関連づけられており、Rheb は経路のフィードバックやストレス適応を研究するうえで中心的なノードとみなされています。ヒト細胞では、Rheb 活性が翻訳プログラムや同化（アナボリック）過程に影響し、栄養制限下やマイトジェン刺激下で細胞表現型を再構築し得ます。

Rheb ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における RHEB 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、RHEB内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、RHEBの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、RHEBが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。