Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
RGS4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-418013
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RGS4 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico RGS4, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: RGS4 Antibody (H-12): sc-398348
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RGS4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-418013 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
RGS4 codifica il Regolatore della Segnalazione delle Proteine G 4, una proteina che attiva l’attività GTPasica e accelera la terminazione della segnalazione mediata dai GPCR promuovendo l’idrolisi del GTP della subunità Gα. Limitando le vie a valle dei secondi messaggeri, come la segnalazione cAMP/PKA e PLCβ/Ca2+, RGS4 modula la desensibilizzazione recettoriale, l’eccitabilità neuronale e gli output trascrizionali dipendenti dallo stimolo. È espresso in diversi tessuti, con ruoli di rilievo nel sistema nervoso, ed è stato collegato alla modulazione della segnalazione sinaptica e a processi di neurosviluppo. Alterazioni dell’espressione di RGS4 e dell’equilibrio della sua segnalazione sono state associate a fenotipi neuropsichiatrici e cognitivi, rendendolo rilevante per studi meccanicistici sulla regolazione delle vie GPCR.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RGS4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RGS4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RGS4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RGS4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RGS4.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RGS4 per lo studio della segnalazione di RGS4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni RGS4 critici per la funzione di RGS4
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RGS4 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal RGS4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal RGS4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RGS4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal RGS4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR RGS4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RGS4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RGS4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.