RGC32 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404843-ACT

RGCCは、補体32応答遺伝子（response gene to complement 32：RGC32）をコードしており、補体活性化や多様な細胞ストレスシグナルによって誘導される、細胞周期および炎症に関連するタンパク質です。RGC32は、サイクリン依存性キナーゼ経路や細胞移動に影響するRhoファミリーシグナルとの相互作用を介して、G2/M期の進行、DNA複製ダイナミクス、ならびに細胞骨格の再構築の制御に関与することが示唆されています。血管系および上皮系の文脈では、RGC32はTGF‑β駆動性応答、酸化ストレスプログラム、免疫シグナル伝達の調節に関与するとされ、これらのプロセスは線維化、血管リモデリング、腫瘍微小環境の生物学でしばしば研究対象となります。RGCC発現の変化は複数の疾患状況で報告されており、増殖、分化、炎症性遺伝子ネットワークの研究における機構的ハブとしての有用性を支持しています。

RGC32 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RGCCの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RGC32 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RGCC 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRGCC転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RGC32の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRGCC遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRGC32依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRGCC発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRGC32経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。