Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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RFC4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403956
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RFC4 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico RFC4, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: RFC4 Antibody (C-9): sc-28301
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RFC4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-403956 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
RFC4 (Replication Factor C, subunità 4) è un componente fondamentale del complesso caricatore di clamp RFC, che carica PCNA sul DNA primerizzato, consentendo una sintesi del DNA processiva durante la replicazione e coordinando la riparazione del DNA. Attraverso interazioni guidate dall’ATPasi con PCNA e con le DNA polimerasi, RFC4 supporta la progressione della fase S, la stabilità della forcella replicativa e le risposte associate ai checkpoint allo stress replicativo. L’alterazione di RFC4 perturba la dinamica della replicazione del DNA e può aumentare l’instabilità genomica, collegando la funzione del complesso RFC a vie comunemente modificate nei disordini proliferativi. Come parte della più ampia rete di replicazione e riparazione del DNA, RFC4 è spesso studiato nel contesto della regolazione del ciclo cellulare e delle risposte allo stress.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RFC4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RFC4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RFC4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RFC4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RFC4.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RFC4 per lo studio della segnalazione di RFC4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni RFC4 critici per la funzione di RFC4
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RFC4 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal RFC4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal RFC4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RFC4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal RFC4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR RFC4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RFC4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RFC4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.