REV1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402251-ACT

ヒトREV1は、DNA損傷耐性において足場（スキャフォールド）として機能し、特殊な損傷乗り越え合成（TLS）酵素としても働くYファミリーDNAポリメラーゼをコードしています。REV1は損傷塩基の向かい側への塩基挿入を調整し、REV7/MAD2L2や他のTLS因子との相互作用を介してポリメラーゼζをリクルートすることで、複製フォークが嵩高いDNA付加体をバイパスできるようにします。この活性は複製ストレス応答、複製後修復、ゲノム安定性経路と統合されており、TLSのバランスが変化すると変異誘発や遺伝毒性ストレスに対する細胞感受性に影響を及ぼし得ます。そのためREV1は、がん生物学やその他のゲノム不安定性に関連する病態に関わるDNA修復機構、複製忠実度、変異蓄積の観点から広く研究されています。

REV1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性REV1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

REV1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における REV1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はREV1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性REV1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のREV1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるREV1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびREV1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるREV1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。