Retinal RX CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403576-ACT

RAX（retinal homeobox）は、網膜RX転写因子をコードする遺伝子であり、初期の眼領域（eye field）の規定および網膜前駆細胞の維持に必須の、paired-typeホメオドメイン型調節因子です。神経外胚葉のパターニング過程における細胞運命決定に影響を与えつつ、発生に関わる遺伝子制御ネットワークを統合することで、視細胞および神経網膜の分化プログラムの上流で機能します。RAXの活性は、発生中の網膜における増殖と分化を制御する経路（眼の形態形成を精緻化するシグナル入力を含む）と連動しています。RAXの発現や機能の破綻は、無眼球症／小眼球症などの先天性眼奇形や、より広範な網膜発生異常と関連しており、疾患モデル化や発生生物学研究における重要性を裏づけています。

Retinal RX CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RAXの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Retinal RX CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RAX 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRAX転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Retinal RXの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRAX遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRetinal RX依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRAX発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRetinal RX経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。