RelB Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400371-ACT

O gene humano **RELB** codifica a RelB, um fator de transcrição da família **NF-κB** que forma heterodímeros ativos com **p52 (NFKB2)** para impulsionar a sinalização **não canônica** de NF-κB. A RelB regula programas gênicos que controlam a diferenciação de células imunes, respostas inflamatórias e antivirais, a organogênese linfoide e a sobrevivência celular por meio de translocação nuclear dependente de estímulo e ligação a promotores/realçadores (enhancers). A atividade de **RELB** é comumente associada a vias a jusante de receptores como **CD40**, **BAFFR** e **LTβR**, integrando sinais que remodelam a cromatina e a transcrição em compartimentos mieloides e linfoides. A desregulação da sinalização de **RELB** tem sido associada à inflamação crônica, disfunção imune e estados transcricionais oncogênicos em múltiplos contextos tumorais, tornando-o um nó útil para estudos mecanísticos de reconfiguração da rede de NF-κB.

RelB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RELB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RelB O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RELB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RELB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RelB. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RELB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RelB no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RelB em células tumorais com expressão de RELB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.