RELA/NFκB p65 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400004-NIC

RELAはNFκBのp65サブユニットをコードしており、炎症、自然免疫および獲得免疫応答、細胞生存、ストレスシグナル伝達を制御する誘導性遺伝子プログラムを調節する中心的な転写因子です。p65は（一般にNFKB1/p50と）ヘテロ二量体を形成して機能します。カノニカルなNFκBシグナル伝達では、TNF、IL-1、パターン認識受容体の活性化などの上流シグナルがIKKによるIκBのリン酸化と分解に収束し、その結果p65が核内へ移行して転写を活性化します。RELAの活性は翻訳後修飾やMAPK、JAK/STAT、インターフェロン経路とのクロストークによってもさらに制御され、サイトカイン産生、アポトーシス抵抗性、細胞分化に影響を及ぼします。NFκB/RELAシグナルの破綻は、慢性炎症状態や腫瘍化過程（腫瘍微小環境におけるシグナル伝達の変化や生存経路の活性化を含む）にしばしば関与します。

RELA/NFκB p65 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における RELA 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、RELA内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、RELAの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、RELAが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。