Reg IIIα CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404278

概要

REG3Aは、消化管上皮やその他の粘膜表面に主に発現するC型レクチンファミリーの抗菌タンパク質である分泌性レクチンReg IIIαをコードします。Reg IIIαは微生物の細胞壁多糖に結合し、自然免疫によるバリア防御を支えるとともに、炎症下における宿主―微生物叢（マイクロバイオータ）の恒常性維持に寄与します。その発現は、IL-22/STAT3シグナル伝達やNF-κB関連応答など、サイトカイン駆動の上皮プログラムによって制御され、粘膜障害および修復の指標としてしばしば用いられます。バリア組織に影響する炎症性・代謝性疾患においてREG3Aの異常な発現レベルが報告されており、上皮ストレス応答や微生物誘導性炎症の研究において重要です。

Reg IIIα CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるREG3A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、REG3A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、REG3Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Reg IIIαタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Reg IIIαシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、REG3A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Reg IIIαの機能に不可欠なREG3Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、REG3Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Reg IIIα CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびReg IIIα CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、REG3A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Reg IIIα HDRプラスミド（h）および Reg IIIα HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはREG3Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のREG3A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。