Reg IIIα Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404278

Panoramica

REG3A codifica la lectina secreta Reg IIIα, una proteina antimicrobica della famiglia delle lectine di tipo C espressa prevalentemente dalle cellule epiteliali del tratto gastrointestinale e di altre superfici mucosali. Reg IIIα si lega ai carboidrati della parete cellulare microbica, sostiene la difesa innata della barriera e contribuisce all’omeostasi ospite–microbiota durante l’infiammazione. La sua espressione è regolata da programmi epiteliali guidati da citochine, inclusa la segnalazione IL-22/STAT3 e risposte associate a NF-κB, ed è frequentemente utilizzata come indicatore di danno e riparazione della mucosa. Livelli alterati di REG3A sono stati riportati in condizioni infiammatorie e metaboliche che interessano i tessuti di barriera, rendendolo rilevante per studi sulle risposte epiteliali allo stress e sull’infiammazione innescata dai microbi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Reg IIIα (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene REG3A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del REG3A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto REG3A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Reg IIIα.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di REG3A per lo studio della segnalazione di Reg IIIα, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni REG3A critici per la funzione di Reg IIIα
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di REG3A per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Reg IIIα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Reg IIIα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus REG3A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Reg IIIα Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Reg IIIα (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia REG3A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio REG3A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.