RecQL4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403224-ACT

RECQL4は、ヒトRecQ DNAヘリカーゼであるRecQL4をコードしており、DNA複製開始、停止した複製フォークの安定化、相同組換えや塩基除去修復を含む複数のDNA修復機構に必須のゲノム維持因子である。RecQL4は、より広範なDNA損傷応答ネットワークの中で機能し、S期および遺伝毒性ストレス後に染色体の完全性を保つ。RECQL4活性の制御異常は、複製ストレス、染色体不安定性、ならびにDNA損傷誘発剤に対する感受性の変化と関連しており、ゲノム安定性経路の研究において重要である。RECQL4の病的バリアントは、発生異常とがん素因を特徴とする遺伝性疾患と関連しており、疾患関連のDNA修復機能不全の機序モデルとしての有用性を裏づけている。

RecQL4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RECQL4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RecQL4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RECQL4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRECQL4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RecQL4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRECQL4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRecQL4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRECQL4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRecQL4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。