Rec8 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404152-ACT

ヒトREC8はRec8をコードしており、減数分裂に関連するコヒーシンのサブユニットとして、姉妹染色分体の接着（コヒージョン）の確立と維持を助け、相同染色体の対合および組換えを支えます。コヒーシン複合体の動態を調節することで、Rec8は染色体分配の正確性や、ゲノム安定性の広範な経路と交差するDNA修復過程にも寄与します。減数分裂に限定される因子が体細胞で異所性に発現する場合を含め、コヒーシン構成要素の制御異常は、がんや生殖生物学に関連する異数性、複製ストレス、染色体不安定性（CIN）表現型との関係で研究されています。そのためREC8は、コヒージョン依存的な組換え制御、チェックポイントシグナル伝達、染色体アーキテクチャを解析するための有用な標的です。

Rec8 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性REC8の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Rec8 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における REC8 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はREC8転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Rec8の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のREC8遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRec8依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびREC8発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRec8経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。