Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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RD3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405841
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RD3 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico RD3, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: RD3 Antibody (A-9): sc-390653
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RD3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-405841 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
RD3 (degenerazione retinica 3) codifica una piccola proteina citosolica altamente arricchita nei fotorecettori e sostiene la normale omeostasi della fototrasduzione. RD3 regola il traffico e la stabilità delle guanilato ciclasi retiniche (ad es. GUCY2D/GC-E), influenzando la sintesi di cGMP e la segnalazione a valle che controlla l’attività dei canali ionici nei segmenti esterni. Attraverso queste interazioni, RD3 contribuisce al corretto indirizzamento delle proteine verso il ciglio/segmento esterno e protegge le guanilato ciclasi da un’attivazione inappropriata. L’alterazione della funzione di RD3 è associata a degenerazioni retiniche ereditarie, rendendolo un bersaglio utile per analizzare i meccanismi di mantenimento dei fotorecettori e della segnalazione dipendente dal cGMP.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RD3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RD3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RD3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RD3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RD3.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RD3 per lo studio della segnalazione di RD3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni RD3 critici per la funzione di RD3
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RD3 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal RD3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal RD3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RD3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal RD3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR RD3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RD3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RD3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.