RBM38 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403488-ACT

RBM38 (proteína 38 com motivo de ligação a RNA) é uma proteína humana de ligação a RNA que modula a regulação gênica pós-transcricional ao controlar a estabilidade, a localização e a tradução do mRNA. Ela está implicada no controle do ciclo celular e em programas de resposta ao estresse por meio de interações específicas de sequência com transcritos-alvo, influenciando vias ligadas à proliferação e à diferenciação. A atividade de RBM38 se cruza com redes de processamento de RNA e pode moldar circuitos regulatórios associados ao p53 ao ajustar a expressão de fatores envolvidos em respostas de checkpoint. A desregulação da expressão de RBM38 foi relatada em múltiplos contextos relevantes para doenças, tornando-a um nó útil para estudar mecanismos centrados em RNA que afetam o fenótipo celular.

RBM38 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RBM38 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RBM38 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RBM38 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RBM38, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RBM38. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RBM38 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RBM38 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RBM38 em células tumorais com expressão de RBM38 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.