RBM25 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-407825-ACT

ヒトRBM25は、スプライソソームに結合して選択的スプライシングを制御するRNA結合性のスプライシング調節因子をコードしており、代替pre-mRNAプロセシング、エクソン選択、mRNA成熟に影響を与える。転写産物アイソフォームのバランスを制御することで、RBM25はRNA品質管理に寄与し、さらに細胞周期の進行、DNA損傷応答、ストレス適応的な遺伝子発現などに関わる下流プログラムにも影響を及ぼす。RBM25活性の異常は、がんを含む複数の疾患関連状況で観察される、異常なスプライシングパターンや、アポトーシスおよびシグナル伝達関連転写産物の発現変化と関連づけられている。転写産物全体に広範な影響を及ぼすスプライシング因子として、RBM25はRNAプロセシングと表現型の帰結を結び付ける制御ネットワークをマッピングする目的で、しばしば研究対象となっている。

RBM25 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RBM25の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RBM25 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RBM25 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRBM25転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RBM25の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRBM25遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRBM25依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRBM25発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRBM25経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。