RBM10 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-418527-ACT

RBM10は、選択的スプライシング、mRNAの安定性、スプライソソームの組み立てを調節するRNA結合タンパク質をコードしており、多様な遺伝子プログラムにわたって転写産物アイソフォームの選択を形作ります。RBM10依存的なスプライシングは、細胞周期の進行、アポトーシス、分化に影響し、Notch経路構成因子を含むシグナル出力や、その他の増殖制御関連転写産物の転写後制御とも連関します。RBM10の活性異常や変異は、複数のがんの文脈や先天性発達障害で観察される異常なRNAプロセシング表現型と関連づけられており、スプライシング攪乱が細胞状態をどのように再編成するかを研究するうえで有用なノードとなっています。核内でRNA代謝を制御する因子として、RBM10はトランスクリプトーム全体でのエクソン使用、遺伝子発現ネットワーク、ストレス応答性RNAプロセシングへの影響という観点からもしばしば検討されています。

RBM10 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RBM10の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RBM10 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RBM10 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRBM10転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RBM10の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRBM10遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRBM10依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRBM10発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRBM10経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。