RB1CC1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-416259-ACT

ヒトRB1CC1（FIP200としても知られる）は、ULK1オートファジー開始複合体の中核構成因子であり、栄養およびエネルギー状態のシグナルに応答して、オートファゴソーム形成の初期段階を統括します。ULK1/2、ATG13、ATG101との相互作用を介して、RB1CC1はAMPKおよびmTORにより制御されるシグナル伝達をオートファジーフラックスへと結び付けるとともに、細胞骨格の組織化や選択的カーゴの取り扱いにも寄与します。RB1CC1依存的なオートファジーは、ミトコンドリアの品質管理、プロテオスタシス、ならびに細胞のストレス適応に影響を及ぼします。RB1CC1関連経路の制御異常は、腫瘍生物学や神経生物学に関連する文脈で示唆されており、増殖制御、ストレス応答、経路間クロストークを研究するための機構的ハブとしての利用を支持します。

RB1CC1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RB1CC1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RB1CC1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RB1CC1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRB1CC1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RB1CC1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRB1CC1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRB1CC1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRB1CC1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRB1CC1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。