RANTES Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m2): sc-422845-KO-2

Panoramica

Il gene murino **Ccl5** codifica **RANTES (CCL5)**, una chemochina secreta da cellule T attivate, cellule NK, macrofagi e piastrine, che dirige il traffico dei leucociti attraverso la segnalazione mediata da **CCR1**, **CCR3** e **CCR5**. La chemiotassi guidata da RANTES modella il reclutamento delle cellule infiammatorie, promuove le interazioni tra cellule immunitarie ed endotelio e coordina reti citochiniche che influenzano il rimodellamento tissutale e le risposte antivirali. L’attività di Ccl5/RANTES interseca programmi associati a **NF-κB** e agli **interferoni** e può modulare la polarizzazione mieloide e la localizzazione degli effettori linfocitari. Una segnalazione di Ccl5 disregolata è stata implicata, nei topi, in modelli di infiammazione cronica e autoimmunità, neuroinfiammazione, infiammazione metabolica e nelle dinamiche del microambiente tumorale-immunitario.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RANTES (m2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ccl5 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ccl5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ccl5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RANTES.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ccl5 per lo studio della segnalazione di RANTES, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ccl5 critici per la funzione di RANTES
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ccl5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RANTES CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal RANTES CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ccl5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RANTES Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR RANTES (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ccl5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ccl5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.