RANK CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400559-ACT

TNFRSF11A は、破骨細胞の分化・活性化・生存を RANKL により制御する過程において中核的なシグナル伝達ハブとして機能する、TNF 受容体スーパーファミリー分子 RANK をコードしています。リガンド結合により RANK は TRAF などのアダプタータンパク質をリクルートし、カノニカルおよびノンカノニカル NF-κB シグナル、MAPK カスケード、ならびに AP-1/NFATc1 依存的な転写プログラムを開始します。これらの経路は骨微小環境と免疫系からのシグナルを統合し、RANK 活性を骨免疫学（osteoimmunology）および炎症性遺伝子発現の制御と結び付けます。RANK シグナルの異常は、骨リモデリングの異常表現型や免疫細胞機能の変化と関連しており、TNFRSF11A は骨格生物学および炎症生物学の機序解明研究で広く用いられる標的となっています。

RANK CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TNFRSF11Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RANK CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TNFRSF11A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTNFRSF11A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RANKの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTNFRSF11A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRANK依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTNFRSF11A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRANK経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。