RAGECRISPR激活质粒(m2): sc-419040-ACT-2
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- RAGE CRISPER激活质粒（m2）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，目的在于特定上调基因表达
- RAGE CRISPR 激活质粒 (m2)包含三种质量比为1:1:1的质粒：一种质粒编码与转录激活结构域VP64融合的去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，和杀稻瘟素抗性基因；一种质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白，和潮霉素抗性基因；一种质粒编码与两个MS2 RNA适体融合的目标特异的20 nt向导RNA，和嘌呤霉素抗性基因。
- 形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因提供转录因子的招募
- 由 RAGE CRISPR 激活质粒 (m2) 和 RAGE CRISPR 激活质粒 (m22) 编码的 gRNA 分别针对 Ager 转录起始位点上游的不同调控区域。其中一种或两种设计可能可用
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：RAGE: sc-365154，通过WB, IF或者IHC分析
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RAGECRISPR激活质粒(m2) | sc-419040-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
小鼠Ager基因编码晚期糖基化终末产物受体（RAGE）。RAGE属于免疫球蛋白超家族的多配体模式识别受体，可结合AGEs、S100蛋白、HMGB1以及与淀粉样蛋白相关的配体，从而放大细胞应激信号。RAGE的激活会促进NF-κB依赖的转录，启动MAPK与JAK/STAT通路，诱导活性氧（ROS）生成，并维持炎症相关基因的持续表达，进而影响内皮细胞激活、白细胞募集和组织重塑。在小鼠研究体系中，Ager/RAGE生物学常被用于探讨代谢性炎症、血管功能障碍、神经炎症及纤维化相关过程等情境，这些情境中配体累积与慢性先天免疫信号相互交织。对小鼠细胞或动物模型中的Ager进行基因编辑，有助于从机制层面解析配体特异性信号传导、与Toll样受体的受体串扰，以及与免疫与屏障组织相关的下游转录程序。
RAGE CRISPR激活质粒（m2）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Ager的表达。
RAGE CRISPR激活质粒（m2）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的Ager基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于Ager转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性RAGE表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的Ager位点，并能够研究内源性位点上依赖于RAGE的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Ager表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟RAGE通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。