Rag C Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-424807

Panoramica

Rragc codifica Rag C, una piccola GTPasi lisosomiale che forma un eterodimero con RagA o RagB per collegare la disponibilità intracellulare di amminoacidi al reclutamento e all’attivazione di mTORC1 sul lisosoma. Attraverso interazioni con il complesso Ragulator e con gli effettori a valle di mTORC1, Rag C contribuisce a regolare la sintesi proteica, l’autofagia, la biogenesi dei lisosomi e la riprogrammazione metabolica in risposta ai segnali nutritivi. Un’alterazione della segnalazione delle GTPasi Rag può compromettere i checkpoint di rilevamento dei nutrienti ed è stata implicata in fenotipi rilevanti per il controllo della proliferazione, la funzione delle cellule immunitarie e l’adattamento allo stress cellulare. Nei sistemi murini, Rag C supporta studi meccanicistici sulla crescita guidata da mTOR e sull’equilibrio tra processi anabolici e catabolici durante lo sviluppo e in contesti pertinenti alla malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Rag C (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Rragc in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Rragc insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Rragc a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Rag C.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Rragc per lo studio della segnalazione di Rag C, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Rragc critici per la funzione di Rag C
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Rragc per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Rag C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Rag C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Rragc. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Rag C Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Rag C (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Rragc per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Rragc definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.