Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Raf-1 Antibody (540): sc-52827. Western blot analysis of Raf-1 expression in non-transfected: sc-117752 (A) and human Raf-1 transfected: sc-113164 (B) 293T whole cell lysates.
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Raf-1双切口酶质粒(h): sc-400202-NIC
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- Raf-1 双切口酶质粒（h）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- Raf-1双切酶质粒（h）和Raf-1双切酶质粒（h2）编码针对RAF1的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：Raf-1: sc-7267，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
Raf-1双切口酶质粒(h) | sc-400202-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Raf-1双切口酶质粒(h2) | sc-400202-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RAF1 基因编码丝氨酸/苏氨酸激酶 Raf-1，是 RAS 信号通路的核心效应分子，可将已激活的受体酪氨酸激酶输入传递至 MAPK/ERK 级联通路。Raf-1 通过磷酸化包括 MEK1/2 在内的下游激酶并继而激活 ERK1/2，从而调控细胞周期进程、分化、凋亡及应激反应。RAF1 活性失调以及 MAPK 通路信号异常与肿瘤性转化和耐药机制相关；同时，RAF1 的胚系或体细胞改变也与发育综合征及心肌病相关的信号缺陷有关。作为整合生长因子与炎症信号的枢纽，Raf-1 常被用于研究其与 PI3K-AKT 的通路串扰、反馈调控以及由磷酸酶介导的激酶活性控制等机制。
Raf-1 双切酶质粒（h）由一对匹配的质粒组成，专为在 human 细胞系中对 RAF1 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对RAF1内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏RAF1的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了RAF1基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。